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說一說蛋白質的雙向電泳注意事項
點擊次數:903 更新時間:2022-04-26
  蛋白質的雙向電泳的初向為等電聚焦(Isoelectrofocusing,IEF),根據蛋白質的等電點不同進行分離;第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后,可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。
  蛋白質的雙向電泳注意事項:
  1.一向聚焦與二向電泳之間需要平衡,時間視蛋白質的性質而定,一般為10min,最多不超過15min。
  2.過量的上樣量會引起雙向圖形畸形,特別在一向聚焦時,當樣品濃度超過5mg時,則蛋白質凝聚和沉淀,使二向時產生水平和垂直條紋。
  3.含尿素的試劑均應避免過高的溫度處理,一般不要超過30℃,否則尿素分解產生異硫氰酸鹽會引起羧基甲?;鴮е码姾刹痪恍?。
  4.第一向中過量的去污劑會嚴重影響雙向電泳圖譜,因此聚焦完畢進行平衡前,用雙蒸餾水沖洗膠條,以除去殘留的去污劑。
  5.雙向電泳中雙向凝膠間的界面緊密接觸非常重要,如果接觸不好或者兩者之間留有氣泡,則導致轉移時分子擴散。
  6.雙向電泳中的條紋現象是常見的問題。水平條紋可能與一向電泳時間不夠,聚焦不好有關,或者在加樣處產生沉淀和引起重新溶解所致;縱向條紋則表明樣品沒*溶解,這可以通過調整樣品量,增加電泳時間,改善樣品的溶解狀態,同時在加樣前通過高速離心以除掉所有不溶物。

滬公網安備 31011802001676號

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